灭菌后，待温度下降后及时送入接种室或接种箱。用甲醛和高锰酸钾熏蒸灭菌，同时开紫外线灯光灭菌30分钟，方可开始接种。
接种操者作应先用75％酒精对手涂擦消毒。接种针在75％酒精浸后经火焰烧灼冷却后伸入试管内，将斜面母种分切成4～5小块，每瓶原种接入一小块带培养基的母种，接入瓶中紧贴在培养料面上，棉塞在火焰上烤一下迅速塞上瓶口，在瓶壁注明接种日期、菌株号。整个接种过程均按无菌操作要求进行，接种操作要求准确、迅速。已灭过菌的料瓶，尽量当天接完，不宜久放。
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