在此以马铃薯葡萄糖琼脂培养基（简称PDA培养基）为例进行说明。
（1）配方：去皮马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000毫升。
图6棉塞的制作过程
（2）制法：先将马铃薯洗净、去皮、挖掉芽根，切成薄片或丁，称取200克放入锅中加水1000毫升煮沸至马铃薯酥而不烂的程度，用8层纱布过滤，取出滤液。把20克琼脂加入滤液中继续用小火加热，待琼脂全部溶化后补足水1000毫升，加入葡萄糖20克，用4～6层纱布过滤。然后将滤液分装到试管中，装入量为试管的1／4左右。装管时动作要利索，勿使试管口沾上培养基，如果沾上培养基应即时用纱布擦干净，以防杂菌在管口生长。管口用普通棉花（脱脂棉易吸水，高压灭菌时棉塞易受潮）作棉塞塞住。棉塞要求中央稍厚，旁边厚薄均匀，松紧适度，与试管壁紧密接触。棉塞的制作过程见图6。
图7斜面试管的摆放
棉塞塞好后，把试管竖放在试管箩或筒中进行灭菌。棉塞上要覆盖牛皮纸，以防冷凝水把棉塞弄湿。消毒前要注意放尽灭菌锅内的冷气。灭菌锅压力达107．9～117．7千帕，温度121℃以上时持续灭菌30分钟。停止加温后，让压力降至0时打开锅盖留一小缝，让剩余热气把棉塞烘干。待温度稍降后，在桌上先放一木棒再把试管排成斜面，斜面长度是试管的1／3～1／2（图7）。
