结果：抗酸杆菌呈红色，背景呈灰蓝色。
注意事项：
（1）苯酚复红液，须加温37～40℃时，只需染色15～20分钟。
（2）盐酸乙醇分化应严格掌握，一般情况下经水洗后，视切片的组织带有淡粉红色。
（3）亚甲蓝（美蓝）复染以后用95％乙醇快速分化，防止过度脱色（保持对比色彩度）。
（三）胃幽门弯曲菌
Wathin－starrg胃幽门弯曲菌染色法
试剂配制：
（1）0.2mol／L 醋酸缓冲液（pH 3.6）：A 液92.5ml醋酸1.2ml，蒸馏水加至100ml；B 液7.5ml（无水醋酸钠2.72g，加蒸馏水至100ml）。
（2）1％硝酸银液：硝酸银1g，0.2mol／L 醋酸缓冲液（pH3.6）100ml。
（3）2％硝酸银液：硝酸银0.2g，0.2mol／L 醋酸缓冲液（pH3.6）10ml。
（4）5％明胶液：明胶5g，0.2mol／L 醋酸缓冲液96ml。此液需要加温35～40℃，不断摇动使之溶解，冷却后使用。
（5）3％对苯二酚液：对苯二酚3g，0.2mol／L醋酸缓冲液10ml。
（6）明胶对苯二酚液：3％对苯二酚2ml，5％明胶液30ml（明胶加温后加入对苯二酚液）。
（7）显影液：明胶对苯二酚液16ml，2％硝酸银液3ml。
染色步骤：
（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。
（2）0.2mol／L 醋酸缓冲液洗2次。
（3）将切片置入1％硝酸银液内1小时左右（温箱56℃）（4）直接把切片取出，立即浸入显影液内2～3分钟。
（5）将切片浸入56℃蒸馏水中洗1～2分钟。
（6）蒸馏水洗1次。
（7）无水乙醇脱水，二甲苯透明和中性树胶封固。
结果：胃幽门弯曲菌呈棕黑色或黑色，背景呈淡黄色。十三、病毒包涵体染色Macchiavello包涵体染色法染色步骤：
（1）中性甲醛液固定组织，石蜡切片，常规脱蜡至水。
（2）蒸馏水稍洗。
（3）用0.25％碱性复红水溶液染色30分钟。
（4）直接用0.5％柠檬酸水溶液分化数秒钟。
（5）蒸馏水洗2～3次。
（6）入1％亚甲蓝水溶液复染15～30秒。
（7）水洗2分钟。
（8）95％乙醇及无水乙醇迅速脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
注意事项：
（1）碱性复红液染色后用柠檬酸液分化要快速，防止脱色，在浸入蒸馏水洗后，可在镜下观察均呈红色的清晰对比度。
（2）亚甲蓝复染时，将切片上下移动使切片染色均匀。乙醇易使组织脱色，根据不同组织的情况可直接用无水乙醇脱水。
十四、神经组织的染色方法
1WeiSert－Pal髓鞘染色方法
试剂配制：
WeiSert媒染剂：
重铬酸钾5g氟化铬2g
蒸馏水100ml加热溶解
Weigert碳酸锂苏木精：
10％乙醇性苏木精10ml碳酸锂饱和水溶液1ml蒸馏水90mlPal褪色液：草酸亚硫酸钾
染色方法：1g 1g蒸馏水200ml
（1）甲醛溶液固定的组织入媒染液内4～5天，至其呈棕色，水洗，硝化纤维。法包埋。
（2）切片15～25μm。
（3）蒸馏水洗。
（4）碳酸锂苏木精24～48小时，室温或37℃染8小时。
（5）短时自来水洗。
（6）0.25％高锰酸钾30秒。
（7）自来水洗。
（8）Pal褪色液分化至白质呈蓝黑色，灰质近乎无色。
（9）自来水10分钟。
（10）乙醇脱水，二甲苯透明，封固。
结果：髓鞘呈黑蓝色。背景为淡灰色。
2Weil髓鞘染色方法
该法为石蜡切片的理想方法，本室常用此法。
试剂配制：
Weil苏木精：
10％纯乙醇性苏木精5ml蒸馏水45ml
4％铁明矾50ml
Weilgert分化液：硼砂2g
蒸馏水200ml
铁氰化钾
染色方法：2.5g
（1）切片脱蜡至水。
（2）蒸馏水洗。
（3）Weil苏木精染色15分钟（45～50℃）。
（4）自来水洗15分钟。
（5）4％铁明矾分化至灰白质分辨明显。必要时可用Weilgert液补充分化。
（6）自来水洗
（7）脱水，透明，中性树胶封固。
结果：髓鞘呈蓝黑色。背景为淡灰色。
3Kullshitzky髓鞘染色方法（Heidenhains改良法）石蜡、冰冻或硝化纤维切片均能用，此法快速而可靠。
试剂配制：
10％乙醇性苏木精10ml碳酸锂饱和水溶液7ml蒸馏水83ml染色方法：
（1）切片20μm。
（2）4％铁明矾媒染24～48小时。
（3）3次蒸馏水洗。
（4）苏木精溶液染1～3小时，间隔20分钟摇动溶液一次。
（5）充分自来水洗。
（6）一般不需分化，如果染色过深可浸Weilgert分化液内分化至背景清晰为止。
（7）乙醇脱水，透明，封固。
结果：髓鞘中蓝黑色。背景为淡黄色。
（一）神经纤维染色方法
1Holmes神经纤维染色方法
试剂配制：缓冲液A：
硼酸12.4g蒸馏水1000ml
缓冲液B：
硼酸
浸润液：19g蒸馏水1000ml
缓冲液A55ml缓冲液B45ml
1％硝酸银1ml蒸馏水394ml
10％吡啶5ml
还原液：
对苯二酚
硫酸钠1g 10g蒸馏水100ml
还原液可反复使用，但保存超过1周即失效。
染色方法：
（1）20μm 或更厚的石蜡切片。
（2）切片脱蜡至水。
（3）浸20％硝酸银，室温，暗处，作用2小时，更厚的切片浸润过夜则更为有益。
（4）3次更换蒸馏水洗10分钟。
（5）浸润液12小时37℃。浸润液量不得少于20ml，容器密盖。
（6）吸干，放入还原液2分钟，如还原液预温至25℃则效果更佳。
（7）自来水洗3分钟，再用蒸馏水洗。
（8）0.2％氯化金调色3分钟，或至切片不显棕色为止。
（9）短时蒸馏水洗。
（10）移入2％草酸，镜下观察轴索及背景区分明显为止。
（11）蒸馏水洗。
（12）5％次亚硫酸钠固定5分钟。
（13）自来水洗。
（14）乙醇脱水，透明，封固。
结果：神经纤维呈黑色。背景为灰紫色。
（注：组织用升汞固定能增进染色。该法亦适用用周围神经）2Bielschowsky神经纤维染色方法神经纤维的构成为轴索及其侧支。该法所显示的是细胞的神经纤维，同时可观察到神经元的内部及胞体外部的状况。
试剂配制：10％硝酸银10ml，加40％氢氧化钠6滴，边加边摇动，形成棕黑色的凝集物，用浓氨水逐滴加入并摇动至完全溶解，最后以蒸馏水25ml稀释。
染色方法：
（1）组织以10％甲醛溶液固定，自来水洗1小时。
（2）蒸馏水洗12～24小时。
（3）冰冻切片10μm。
（4）切片由蒸馏水移入3％硝酸银24小时或10％硝酸银6小时。在暗处进行。
（5）蒸馏水洗5分钟。
（6）切片移入氨银液约10分钟，至呈棕黑色。
（7）蒸馏水洗。
（8）自来水配制的10％甲醛溶液还原至切片呈黑色。
（9）蒸馏水洗。
（10）0.2％氯化金调色3分钟，水洗。
（11）5％次亚硫酸钠固定3分钟。
（12）水洗，附贴于明胶处理的玻片上。
结果：神经纤维呈黑色。背景为紫色。
注：①调色：调色可使得镀银显示更为清楚。浴金的时间对结果的好坏有很大影响，如果浸银或还原不良，调色则不能改正。有的方法建议调色须延续到轴索肉眼可见，但长时间的调色不能补偿浸银的不妥，调色的好坏系按正确的浸银而定。
②透明：避免用单纯二甲苯，要用俄立干油，封固特别不能用DPX 封固剂，因在短时内即见有显著褪色。
③石蜡切片不如冰冻切片效果好。
（二）神经细胞尼氏小体染色方法
1焦油紫（Cresylviolet）染色法
此法用尼氏小体基本染色，染后短时分化，在脑及脊髓内尼氏小体得以显出，背景清晰，易于计算细胞数量的密度。
（1）染色方法1（石蜡切片法）
①切片脱蜡至水。
②0.1％焦油紫染色10分钟（37℃）。
③蒸馏水洗。
④95％乙醇分化至尼氏小体仅呈紫色。
⑤纯乙醇脱水，透明，封固。
结果：尼氏小体呈紫色，胶质细胞呈淡紫色，背景为无色。
（2）染色方法2（硝化纤维切片法）
①切片25μm。
②80％乙醇浸泡过夜（37℃）。
③蒸馏水洗。
④0.1％焦油紫染色30分钟（60℃）。
⑤待切片冷却后用蒸馏水洗。
⑥切片经过80％，95％异丙醇，纯异丙醇转入二甲苯浸2小时。
⑦再将切片放回异丙醇5分钟，96％异丙醇进行分化，这一步骤需数小时完成，直至在镜下见到尼氏小体呈浅紫色，细胞近无色为止。
⑧切片由96％异丙醇内移至玻片上，用纯异丙醇脱水，二甲苯透明，封固。
结果：同石蜡切片染色法。
（3）染色方法3（冰冻切片法）
①切片附贴于玻片上。
②氯仿1分钟。
③纯乙醇1分钟。
④95％、70％乙醇各1分钟，蒸馏水洗。
⑤焦油紫染色30分钟（60℃）。
⑥待冷却，蒸馏水洗。
⑦95％乙醇分化。
⑧脱水，透明，封固。
结果：同石蜡切片染色法。
2Einarson棓酸青蓝染色法
为一改良的方法，适用石蜡切片，不需要分化，对比清楚，利于显微照相。
试剂配制：
棓酸青蓝0.3g
铬10g
蒸馏水100ml
将铬先溶于少量蒸馏水，加棓酸青蓝煮沸，待冷却后加全量蒸馏水，过滤后使用。
染色方法：
（1）切片脱蜡至蒸馏水。
（2）棓酸青蓝染色过夜。
（3）蒸馏水洗3次。
（4）脱水，透明，封固。
结果：尼氏小体呈黑蓝-紫色。核呈蓝色。背景为浅灰色。
3甲苯胺蓝染色法
染色方法：
（1）切片15～20μm，二甲苯脱蜡，乙醇脱苯至蒸馏水洗。
（2）放入经预热至50℃的1％甲苯胺蓝（toluidneblue）水溶液中，并在56℃温箱中染20分钟。
（3）蒸馏水洗。
（4）70％乙醇约1分钟。
（5）95％乙醇分化，镜下控制。以尼氏小体显示清晰为度（此步镜下控制很重要）。
（6）无水乙醇迅速脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。
结果：细胞核呈淡蓝色。尼氏小体呈深蓝色。背景为无色。
（三）神经胶质细胞染色方法
1Cajal星形细胞染色方法（冰冻切片法）
试剂配制：
固定液（FAB 液）
甲醛溶液15ml蒸馏水85ml
溴化铵2g
Cajal氯化金液：
蒸馏水60ml1％氯化金10ml
氯化汞0.5g
（氯化汞应先加温溶解，冷却过滤，加氯化金充分混合。该液混合后不甚稳定，应临用前新鲜配制）染色方法：
（1）小块组织固定于溴化铵-甲醛溶液内2～10天或加温37℃固定1天。单纯甲醛溶液固定的组织切片浸该液2天同样能得到良好的结果。长期固定于甲醛溶液的脑组织往往失去着色力。
（2）冰冻切片10～20μm。
（3）收集切片置蒸馏水50ml内，加甲醛溶液5～6滴。
（4）蒸馏水洗。
（5）Cajal氯化金液内4～5小时，置暗处，温度20℃为宜。
（6）蒸馏水洗。
（7）5％次亚硫酸钠5～10分钟。
（8）50％乙醇洗，切片附贴至洁净的玻片上，乙醇脱水，木榴油及二甲苯透明，封固。
结果：原浆性及纤维性星形细胞呈紫黑色。
2Nnomenke和Feigin改良的Cajal染色方法（石蜡切片法）该法能获得和cajal冰冻切片同样的结果，这样对已用石蜡包埋的组织，可复切做星形细胞染色，宜于病理诊断。
染色方法：
（1）组织以10％甲醛溶液固定。
（2）石蜡切片20μm。
（3）切片脱蜡至水。
（4）溴化铵-福尔马林液1～3天。
（5）迅速用蒸馏水洗。
（6）移入以下混合液12小时，室温、暗处。
1％氯化金3ml5％氯化汞6.4ml
蒸馏水40ml
（7）蒸馏水洗2～5分钟。
（8）5％次亚硫酸钠5分钟。
（9）蒸馏水洗2～5分钟。
（10）常规脱水，透明，封固。
结果：星形细胞呈黑紫色。背景为粉红色。
（注：白质内纤维星形细胞较灰质内原浆性星形细胞染色为佳，病理状态的星形细胞比正常的染色深）3Weil及Davenport小胶质细胞和少突胶质细胞染色方法试剂配制：氨银液显示小胶质细胞：
氨水2ml10％硝酸银18～20ml
显示少突胶质细胞：
氨水2ml15％硝酸银18～20ml
氨水先放入烧瓶内，然后徐徐将硝酸银液加入，边加边摇，最终呈现乳白色。如果再继续滴加氨水使乳白色溶解，配制平衡的氨银液对细胞染色的成败是关键问题。
染色方法：
（1）冰冻切片20μm。
（2）0.5％氨蒸馏水2～3分钟。
（3）浸氨银液10～20秒（少突胶质细胞浸润时间延长至30～40秒）。
（4）不水洗直接移切片至10％甲醛液内（小胶质细胞）或15％甲醛液（少突胶质细胞），轻轻翻动切片，至其表面呈棕色为度，每张切片均须换新鲜甲醛液处理。
（5）蒸馏水洗，附贴于明胶处理过的玻片上。
（6）脱水，透明，封固。
结果：神经胶质细胞及少突胶质细胞呈黑色。背景为黄棕色。
